Архив автора

Возможно, высокая эффективность этого препарата in vivo является результатом его активации в организме. Wheeler с соавторами (1970b) показали, что кратковременное воздействие бисрхлорэтилнитрозомочевины на культуру клеток HeLa оказывает очень слабый эффект (выжившая фракция 85). Этим препарат отличается от типичных алкилирующих соединений.
Hagemann с соавторами (1973) изучали действие бисрхлорэтилнитрозомочевины на культуру клеток мастоцитомы мыши в разных фазах роста. Эта культура была относительно чувствительна, и после воздействия ‘препарата в концентрации 1020 мкг/мл выжившая фракция уменьшалась до 0,1 Кривая дозаэффект в логарифмической фазе роста характеризовалась значительным плечом с последующим экспоненциальным уменьшением выжившей фракции. В стационарной фазе плечо было резко уменьшено, но наклон экспоненциального участка не отличался. Это показывает одинаковую чувствительность культуры клеток мастоцитомы мыши в разных фазах роста, что соответствует данным, полученным в культуре клеток хомячка.

De Wys (1972а) было проведено количественное сравнение чувствительности опухоли на разных стадиях роста. У первичной опухоли чувствительность резко падала между 8м и 15м днем после перевивки. Выжившая фракция при больших дозах препарата была в 10 000 раз меньше через 8 дней, чем через 15 дней. Между 15м и 21м днем чувствительность первичной опухоли существенно не изменялась. Метастазы в легком через 15 дней обладали приблизительно такой же чувствительностью, как и первичная опухоль через 8 дней. Если сравнивать чувствительность первичной опухоли и метастазов в одно и то же время, то в метастазах выжившая фракция всегда снижалась значительно больше через 15 дней в 500 раз, через 21 день в 100 раз. Чувствительность метастазов по мере роста падала.

Shimoyama и Kimura (1972) изучили действие митомицина С на культуры L1210 и асцитной саркомы Иосиды крыс. Культура саркомы была исключительно высокочувствительна к митомицину С. Так, выжившая фракция падала до 0,0001 при действии препарата в концентрации 100 нг/мг в течение 2 ч. Кривые дозаэффект были экспоненциальны при времени воздействия 30 мин 2 сут и не имели плеча. Величина Dj0 зависела от времени действия препарата и уменьшалась от 60 нг/мл (30 мин) до 1,2 нг/мл (1 сут). Очень низкие концентрации (100 нг/мл в течение 30 мин и 1 нг/мл в течение суток) были неэффективны. Возможно, в концентрации ниже пороговой препарат не достигает мишени. Однако зависимость неэффективной концентрации от времени воздействия скорее указывает на действие репарационных механизмов. Культура L1210 была значительно менее чувствительна, чем культура саркомы Йосиды (Di0 в 100 раз больше), но характер кривых дозаэффект был тот же. Препарат был эффективен при действии в течение 30 мин и выжившая фракция уменьшалась с увеличением времени инкубации от 30 мин до 11 дней. Таким образом, в большинстве изученных типов культур митомицин С действует как типичный алкилирующий препарат.

Djordjevic и Kim (1968) изучили зависимость выжившей фракции от времени действия митомицина С в культуре клеток HeLa. При инкубации с препаратом в течение 1 ч гибели клеток не происходило, что является нетипичным для алкилирующих соединений, а более свойственно антиметаболитам. После 1 ч гибель клеток нарастала экспоненциально со временем при концентрации в среде, равной 100 нг/мл. Препарат в концентрации 10 нг/мл не влиял на жизнеспособность клеток.
Rauth с соавторами (1970) исследовали действие митомицина С на культуру фибробластов L. При концентрации 10 нг/мл препарат был неэффективен даже при длительном воздействии. Более высокие концентрации (0,24 мкг/мл) при воздействии в течение 0,53,5 ч давали экспоненциальную кривую дозаэффект. Следовательно, на фибробласты L в отличие от клеток HeLa митомицин С действовал даже при кратковременной инкубации. Добавление в среду кофеина, ингибирующего систему репарации, вызывало уменьшение D0 в 2 раза, хотя в кривой дозаэффект плечо отсутствовало. Очевидно, отсутствие плеча в кривой не исключает репарацию сублетальных повреждений.

Основным методом изучения гибели опухолевых клеток в разных фазах цикла является определение выжившей фракции при действии препарата на синхронизированную клеточную популяцию. Удовлетворительные методы синхронизации разработаны в настоящее время только для культуры клеток и. поэтому практически все ‘исследования в этом направлении ‘Проведены in vitro на стабильных клеточных линиях. Основной методический прием при определении зависимости выжившей фракции от фазы клеточного цикла заключается в воздействии препарата в различные сроки после окончания действия синхронизирующего агента и в сопоставлении величины выжившей фракции с фазой цикла в синхронизированной популяции во время начала действия препарата. Таким путем была получена информация о действии многих препаратов.