Mauro с соавторами (1968) показали возможность модификации летальных повреждений клеток при изменении состава среды и температуры до или после воздействия препарата. Гибель клеток резко усиливалась при инкубации клеток после воздействия препарата в обычной среде при температуре 24 °С в течение 2 ч. Эта же температура при нахождении клеток в буферном растворе не влияла на летальный эффект препарата. Инкубация клеток в буферном растворе при 24°С до воздействия препарата усиливала гибель клеток, если после воздействия они находились в обычной среде, но не в буферном растворе. Компонентом среды, который был ответствен за усиление гибели клеток при инкубации их при комнатной температуре после воздействия препарата, явля 25 лась сыворотка. Усиление гибели клеток при снижении температуры после воздействия препаратом можно было бы рассматривать как указание на необходимость нормального метаболизма для репарации. Однако против такого предположения говорит отсутствие усиления гибели клеток при инкубации их в буферном растворе. Более того, полученные данные указывают, что нормальный метаболизм усиливает гибель клеток.

Гибель клеток при действии другого бифункционального алкилирующего соединения сернистого иприта (бисхлорэтилсульфид) была детально изучена в культуре клеток V79 китайского хомячка (Mauro е. а., 1968; Mauro, Elkind, 1968 a, b). В этих работах определялась гибель клеток при воздействии препарата на микроколонии, что дало возможность установить роль взаимодействия соседних клеток. Клетки обрабатывали препаратом в различное время после посева, т. е. по мере прогрессивного увеличения размера микроколоний. При этом выжившая фракция увеличивалась экспоненциально со временем и это увеличение шло параллельно увеличению числа клеток в контроле. При воздействии препарата через 1, 18 или 25 ч после посева экспоненциальные участки кривых дозаэффект шли параллельно и были смещены на величину, равную множественности клеток в микроколониях. Следовательно, клетки в группах выживают независимо друг от друга и вероятность группы клеток выжить увеличивается прямо пропорционально среднему числу клеток в группе при изменении этого числа от 1 до 30. Плечо кривой дозаэффект отсутствовало при обработке единичных клеток и было выражено при действии на микроколонии. Очевидно, это результат гибели части клеток в микроколониях после действия низкой дозы препарата.

Центральное место в работах, посвященных изучению механизма действия химиотерапевтических препаратов, в последние годы занимает определение гибели опухолевых клеток. Гибель опухолевых клеток обычно характеризуется величиной «выжившей фракции», т. е. долей клеток в популяции, которые сохранили жизнеспособность после воздействия химиотерапевтического препарата. При этом очень важно определить, что понимается под термином «сохранение жизнеспособности». В большинстве работ живой считается клетка, сохранившая способность к длительному размножению, т. е. клетка с репродуктивной активностью. Клетка, утратившая репродуктивную активность, может быстро дегенерировать или сохранить физическую целостность и активный метаболизм, продолжать расти и даже делиться 12 раза. Следовательно, формы репродуктивной гибели разнообразны. Методы определения выжившей фракции эти формы не дифференцируют, а определяют только долю клеток, способных кпролиферации неопределенно долго или по крайней мере в течение 56 генераций, что достаточно для образования колонии в культуре клеток.

Wheeler с соавторами (1970) показали, что кривая доза эффект одинакова при использовании двух методов: 1) при добавлении препарата в культуру во время посева, 2) при обработке препаратом монослоя с последующим клонированием. Это указывает на сравнимость результатов разных авторов, использовавших один из этих методов. Sakamoto и Elkind (1969) эмбихин добавляли к культуре фибробластов через 18 ч после посева, когда культура состояла из микроколоний, содержащих в среднем по 3 клетки. Преимуществом такой методики перед воздействием препарата на культуру сразу после посева является действие препарата на’ асинхронную культуру в логарифмической фазе. Sakamoto и Elkind (1969) считают, что наличие микроколоний не влияет 24 на результаты. В этой работе было детально изучено влияние фракционирования доз на величину выжившей фракции. Гибель клеток при действии эмбихина в течение 30 мин сравнивали с действием той же дозы, воздействовавшей в два приема с различными интервалами. Выжившая фракция была одинакова при интервале 07 ч, что указывает на отсутствие восстановления сублетального повреждения за этот период. Авторы объясняют это отсутствием сублетальных повреждений и заключают, что эмбихин действует по типу одноударного механизма. При этом возможны два состояния клеток после действия препарата: гибель в результате единичного повреждения и отсутствие какихлибо нарушений.

Таким образом, антиметаболиты вызывали значительное уменьшение выжившей фракции только у перевиваемых лимфатических лейкозов, а алкилирующие соединения, кроме того, у перевиваемых солидных опухолей на ранних стадиях ро ста. На этих же солидных опухолях на поздних стадиях роста, а также у опухолей молочных желез на ранних стадиях роста значительного снижения выжившей фракции получить не удавалось. Следовательно, стадия роста является одним из основных факторов, определяющих степень снижения выжившей фракции в солидных опухолях. Асцитная мастоцитома (единственная асцитная форма, у которой выжившая фракция определялась на разных стадиях роста) была значительно более чувствительна на поздней, чем на ранней стадии роста. Остается неясным, проявляется ли такое соотношение только при действии бисрхлорэтилнитрозомочевины или оно будет иметь место и при действии разных препаратов на другие асцитные опухоли. Метастазы карциномы Люиса были значительно более чувствительны, чем первичная опухоль. Очевидно, в основном это различие являлось следствием размеров метастазов и первичной опухоли, так как последняя всегда была большего размера. Материал для сравнения чувствительности перевиваемых и первичных опухолей ограничен. Спонтанная лимфома мышей AKR ! была несколько менее чувствительна, чем длительно перевиваемая лимфома к части препаратов. Перевиваемые и спонтанные опухоли молочных желез были малочувствительны к антиметаболитам. Обращает внимание весьма незначительное снижение выжившей фракции при лечении опухолей человека. Наименьшая величина выжившей фракции составляла 40 у раковой опухоли легких, леченной циклофосфамидом. Величина выжившей фракции даже у наиболее резистентных опухолей животных была значительно ниже.