Архив рубрики «Использование»

При всех методах определения выжившей фракции устанавливается число опухолевых клеток, вызывающих рост опухоли, гибель животного или образование колонии, в контроле и после введения препарата. Отношение числа живых клеток в контроле и опыте составляет величину выжившей фракции.
Метод конечного разведения был разработан Hewitt (1958) на модели перевиваемого лимфатического лейкоза мышей и затем применен для солидных и асцитных опухолей. Метод заключается во введении животным серийных разведений взвеси опухолевых клеток и состоит из следующих 9 основных этапов: 1) получения взвеси изолированных клеток; 2) серийного разведения взвеси; 3) введения каждого разведения животным; 4) учета результатов (Kallman е. а., 1967;. Hewitt е. а., 1967).

Следует подчеркнуть, что все эти методы основаны на определении способности клеток к размножению и что роль цитологических и гистологических методов при изучении гибели клеток весьма ограниченна. Было бы крайне важно научиться отличать цитологическими методами живые и по 8 гибшие опухолевые клетки. Однако в настоящее время это не представляется возможным, что затрудняет определение жизнеспособности клеток в опухолях человека и решение ряда важных вопросов, например установление зависимости жизнеспособности клетки от ее локализации в опухоли. Представляется маловероятным, что будут найдены цитологические методы определения выжившей фракции, поскольку формы гибели клеток весьма разнообразны. Клетки с различными формами распада ядер (кариорексис, кариопикноз) не являются живыми, и подсчет числа таких клеток в определенных случаях дает полезную информацию. Использование окраски эозином или трипановым синим для определения жизнеспособности клеток не является перспективным, так как этот метод дает ошибочные результаты. Так, Shirakawa и Frei (1970) показали, что в лейкемии L1210, леченной бис3хлорэтилнитрозомочевиной, выжившая фракция составляет при использовании методов биологического титрования и витальной окраски 0,1 и 20 соответственно. Goodman, Ackerman (1973) показали, что витальная окраска не обнаруживает гибели клеток лейкемии L1210 после инкубации их в среде с сарколизином, хлорамбуцилом, метотрексатом, 6меркаптопурином, актиномицином D и винбластином. Поскольку перечисленные препараты активны in vivo при лейкемии L1210, эти данные показывают, что метод витальной окраски не пригоден для определения цитотоксического действия химиотерапевтических препаратов. Drewinko, Gottlieb (1973) показали, что после воздействия адриамицином на культуру клеток лимфомы выжившая фракция составляла 0,001 при определении методом колоний и 38 при определении методом витальной окраски. Это еще раз подчеркивает неадекватность метода витальной окраски для изучения гибели опухолевых клеток. Очевидно, цитологическими методами определяются наиболее грубые и быстрые формы гибели клеток, сопровождающиеся распадом ядра и нарушением проницаемости. Поэтому многие авторы при подсчете числа вводимых опухолевых клеток исключают клетки, проницаемые для красителей, как определенно погибшие.

Такое определение «живой клетки» с точки зрения онколога представляется вполне оправданным. Действительно, при оценке действия химиотерапевтических препаратов важны только клетки, способные к длительной пролиферации, так как только они могут вызвать рост опухоли. Поэтому термином «гибель клетки» в настоящей работе обозначается потеря репродуктивной ее активности.
Методы определения выжившей фракции клеток в опухолях Существует три основных метода определения выжившей фракции клеток в опухолях: 1) метод конечного разведения, 2) метод колоний, 3) косвенные методы, основанные на определении длительности жизни животных или скорости роста опухолей.

Центральное место в работах, посвященных изучению механизма действия химиотерапевтических препаратов, в последние годы занимает определение гибели опухолевых клеток. Гибель опухолевых клеток обычно характеризуется величиной «выжившей фракции», т. е. долей клеток в популяции, которые сохранили жизнеспособность после воздействия химиотерапевтического препарата. При этом очень важно определить, что понимается под термином «сохранение жизнеспособности». В большинстве работ живой считается клетка, сохранившая способность к длительному размножению, т. е. клетка с репродуктивной активностью. Клетка, утратившая репродуктивную активность, может быстро дегенерировать или сохранить физическую целостность и активный метаболизм, продолжать расти и даже делиться 12 раза. Следовательно, формы репродуктивной гибели разнообразны. Методы определения выжившей фракции эти формы не дифференцируют, а определяют только долю клеток, способных кпролиферации неопределенно долго или по крайней мере в течение 56 генераций, что достаточно для образования колонии в культуре клеток.

В монографии детально рассматриваются результаты изучения механизма действия ряда эффективных противоопухолевых препаратов: циклофосфамида (циклофосфана), эмбихина, сарколизина, тиофосфамида, метилнитрозомочевины, бисрхлорэтилнитрозомочевины [ 1,3бис (2 хлорэтил) 1 нитрозомочевины], 5фторурацила, метотрексата, арабинозилцитозина, винбластина, актиномицина D, дауномицина (рубомицина), адриамицина, блеомицина и др.
В настоящую работу включены исследования автора, выполненные в Секторе кинетики химических и биологических процессов Института химической физики АН СССР. Автор выражает глубокую благодарность руководителю Сектора академику Н. М. Эмануэлю за интерес к работе и обсуждение результатов.