postheadericon Метод конечного разведения ия.

Метод конечного разведения требует большого числа животных и длительного наблюдения, поэтому распространение получило определение выжившей фракции методом колоний, который лишен этих недостатков, хотя и является менее чувствительным. Метод колоний был разработан Bruce и Meeker (1964) на модели перевиваемой лимфомы мышей. Из костного мозга или селезенки мышей AKR с лимфомой путем механического измельчения получают взвесь изолированных клеток, которую вводят внутривенно сингенным здоровым мышам. Поскольку колонии из нормальных стволовых клеток образуются лишь в селезенке облученных реципиентов, метод учитывает только колонии опухолевых клеток. Через 8 дней после перевивки селезенку реципиентов фиксируют в растворе Буэна и подсчитывают число колоний. Количество колонииобразующих клеток не показывает абсолютного числа таких клеток во взвеси, так как лишь часть введенных клеток осаждается в селезенке. Введение 100400 клеток давало образование 1 колонии и, следовательно, 106 клеток содержало 2,5ХЮ3104 колонииобразующих единиц (КОЕ). Через 2 ч после введения опухолевых клеток 1,4 введенных КОЕ оседало в селезенке. Клетки, взятые из селезенки, при повторной перевивке не имели повышенного сродства к селезенке. Следовательно, в отношении сродства к селезенке популяция опухолевых клеток гомогенна и оседание в селезенке является случайным. Поскольку 1,4 введенных клеток обнаруживается в селезенке, то общее число КОЕ во взвеси в 70 раз больше, чем следует из числа колоний, образовавшихся в селезенке. Таким образом, 106 клеток лимфомы содержит 7ХЮ5 КОЕ и практическая каждая опухолевая клетка обладает способностью образовывать колонии. Добавление к взвеси опухолевых клеток большого числа нормальных кроветворных клеток не влияло на результаты титрования.

Комментарии запрещены.