20.05.2011

Borsa и Whitmore (1969) изучали гибель фибробластов L при действии метотрексата в течение 3 сут. При этом гибель клеток начиналась при концентрации препарата более 10 нг/мл, достигала максимума (выжившая фракция 1) при концентрации 40 нг/мл и не усиливалась при повышении концентрации до 10 мкг/мл. Таким образом, в кривой доза эффект имелось три участка: плечо, плато и между ними узкая зона эффективной концентрации. Добавление нуклеозидов не изменяло тип кривой, хотя резко усиливало гибель клеток и расширяло зону эффективной концентрации до 10100 нг/мл. При изучении зависимости гибели клеток от времени действия препарата в концентрации, превышающей максимально эффективную, было обнаружено наличие временного порога. Действие препарата в течение 10 ч было неэффективным и лишь через 40 ч достигался максимальный эффект. Таким образом, для достижения максимальной гибели клеток было необходимо действие метотрексата в концентрации, лишь в несколько раз превышающей пороговую, в течение довольно длительного времени. Покоящаяся культура, находящаяся в среде без метионина и гистидина, была практически не чувствительна к метотрексату.

Meeker, 1965; Valeriote e. a., 1966 a, b, 1968; Bruce e. a., 1966, 1967, 1969).
В этих работах впервые была изучена зависимость величины выжившей фракции от дозы для большого числа препаратов разных классов. Bruce с соавторами четко показали, что зависимость выжившей фракции от дозы характеризует роль интенсивности пролиферации для действия препарата. Эти работы стимулировали ряд исследований в различных лабораториях, что поставило изучение клеточных механизмов химиотерапии опухолей на высокий уровень, дало возможность классифицировать химиотерапевтические препараты, количественно охарактеризовать избирательность их действия на опухолевые клетки и осуществить рациональное комбинирование препаратов.

Действие других алкилирующих соединений изучено значительно меньше, чем действие эмбихина и сернистого иприта. Так, клетки HeLa были высокочувствительны к допану на границе фаз Gi и S и практически не чувствительны во второй половине фазы S. По мере прохождения фазы G2 и митоза чувствительность клеток повышалась, но высокая чувствительность наблюдалась лишь в течение короткого периода цикла (Mauro, MadocJones, 1970). Такое распределение чувствительности показывает отсутствие эффективного действия допана на клетки HeLa.

В последующем Lin и Bruce (1972) детально изучили гибель клеток в фибросаркоме КНТ и спонтанной лимфоме при введении различных препаратов. Нелеченая 11дневная фибросаркома содержала 106 КОЕ при титровании по образованию колоний в легком после внутривенного введения клеток. Выжившая фракция уменьшалась экспоненциально до 0,1 по мере увеличения дозы циклофосфамида и бис3хлорэтилнитрозомочевины, а затем падение выжившей фракции замедлялось. Введение 5фторурацила в дозе 100 мг/кг уменьшало выжившую фракцию до 1; при дальнейшем увеличении дозы выжившая фракция не уменьшалась. Гибель клеток определяли при введении арабинозилцитозина, метотрексата и винбластина каждые 48 ч в течение 48 ч. Все эти препараты снижали выжившую фракцию в 10100 раз через 24 ч, после чего выжившая фракция не изменялась. Таким образом, закономерность гибели клеток в фибросаркоме КНТ и перевиваемой лимфоме существенно различаются. В лимфоме после введения циклофосфамида и бис3хлорэтилнитрозомочевины выжившая фракция при возрастании дозы снижалась экспоненциально до уровня 0,00010,00001, а в фибросаркоме всего до 0,1. Кривая дозаэффект для 5фторурацила была экспоненциальна в лимфоме и быстро выходила на плато в фибросаркоме. При многократных введениях арабинозилцитозина и винбластина в лимфоме гибель клеток происходила в течение 72 ч, в то время как в фибросаркоме после 24 ч выжившая фракция снижалась незначительно.