16.05.2011

Метод колоний применяется не только при изучении лимфом, но и опухолей другого гистогенеза, причем колонии обычно возникают в легких. Van den Brenk с соавторами (1973а, б) вводили внутривенно крысам клетки перевиваемых аллогенных сарком. Метод в этом случае оказался чувствительным. Так, после введения 300 клеток реципиентам в возрасте 3 нед возникло 19 колоний. С увеличением возраста реципиента чувствительность метода резко падала. Было отмечено, что определенные воздействия существенно повышали выход колоний. При введении одновременно с опухолевыми клетками антилимфоцитарной сыворотки образовывалось 117 колоний на 300 клеток. Такая высокая клоногенность показывает, что значительная часть введенных клеток оседает в легких. Облучение реципиентов также увеличивало число колоний. Зависимость между логарифмом числа введенных клеток и логарифмом числа колоний была линейна. Таким образом, в оптимальных условиях (молодые реципиенты, подавление иммунитета) метод можно с успехом использовать для определения выжившей фракции, поскольку результат получается быстро и на небольшом числе животных. Интересно, что образование колоний стимулировалось локальным облучением легких при защите вилочковой железы. Очевидно, это является результатом увеличения эффективности посева опухолевых клеток в легких в результате индукции воспаления и пролиферации.

Различие между величиной выжившей фракции при взятии опухоли для титрования через 2 и 24 ч,’наблюдаемое после введения трех препаратов, можно объяснить рядом причин. Между 2 и 24 ч возможен избирательный лизис убитых клеток, что повысит долю выживших клеток в популяции. Против этого говорит одинаковое число клеток в опухоли через 2 и 24 ч после введения циклофосфамида. Кроме того, было показано, что при введении 5фторурацила после меченого 5йод2′дезо’ксиуридина радиоактивность в опухоли 44 через 2 и 24 ч после введения 5фторурацила. была одинакова. Все это показывает, что в течение суток избирательного лизиса погибших клеток в опухоли не происходит. Избирательная пролиферация выживших клеток также вряд ли является фактором, существенно повышающим величину выжившей фракции через 24 ч, так как за 22 ч клетки могут пройти лишь одно деление, что не может объяснить значительного различия в величине выжившей фракции. Наиболее вероятно, что выживание клеток увеличивается в результате того, что в опухолевых клетках, остающихся в организме в течение 24 ч, происходит заживление сублетального повреждения. Ясно, что в этом случае данные, получаемые при взятии клеток для титрования через 24 ч, лучше отражают истинную гибель клеток. Приведенные данные показали низкую чувствительность саркомы ЕМТ6 ко всем изученным препаратам.

Зависимость действия эмбихина от фазы цикла была также изучена в работе Mauro и MadocJones (1970) в условиях, которые существенно отличались от условий опытов в работе Sakamoto, Elkind (1969). Mauro, MadocJones (1970) использовали другую клеточную линию (HeLa), другой метод синхронизации (селекция митозов) и концентрацию 0,5 мкг/мл, при которой препарат был малоэффективен в клетках HeLa. Выжившая фракция в наиболее чувствительной фазе цикла в работе Mauro и MadocJones (1970) была в 100 раз больше, чем в работе Sakamoto и Elkind (1969). Несмотря на такие различия в условиях опытов, результаты в обеих работах полностью совпали: наиболее чувствительными были клетки на границе фаз Gi и S и наименее чувствительными клетки в поздней фазе S. Степень различия между максимальной и минимальной чувствительностью была значительно большей в работе Sakamoto и Elkind (1969), очевидно, вследствие того, что в этой работе использовалась более высокая доза эмбихина.

Следовательно, характер зависимости выжившей фракции от дозы в асинхронной популяции в основном определяется такой зависимостью в резистентной субпопуляции. Чем большей является доля клеток в резистентной субпопуляции и чем больше различие в величине выжившей фракции между резистентной и чувствительной субпопуляцией, тем более справедливо это положение.

Hahn с соавторами (1973) изучили зависимость выжившей фракции от дозы для трех препаратов на перевиваемой солидной саркоме ЕМТ6. Клетки для титрования брали через 2 и 24 ч после введения препарата при развитии опухоли размером 100150 мм3. Общей особенностью всех кривых дозаэффект являлось отсутствие плеча, наличие двух компонентов (начального, чувствительного, и конечного, резистентного) и более высокое значение выжившей фракции через 24 ч. Наиболее значительную гибель клеток в этой опухоли вызывал циклофосфамид. При взятии опухоли для титрования через 24 ч 8090 клеток были чувствительны к препарату. После введения циклофосфамида в дозе 400 мг/кг выжившая фракция составляла 0,1. Различие между результатами титрования через 2 и 24 ч было для этого препарата относительно невелико. 5Фторурацил был значительно менее эффективен: после введения дозы 100 мг/кг достигалось минимальное значение выжившей фракции 50, которое не изменялось при увеличении дозы до 400 мг/кг. При взятии клеток для титрования через 2 ч после введения 5фторурацила выжившая фракция была существенно меньше, чем при взятии через 24 ч. Наиболее резкое различие в величине в выжившей фракции (в 100 раз) при взятии клеток через 2 и 24 ч имело место при введении блеомицина.