15.05.2011

Van Putten и Lilieveld (1970) показали, что клетки перевиваемой остеосаркомы характеризуются высокой чувствительностью к циклофосфамиду. После введения 300 мг/кг выжившая фракция в опухоли составляла 0,0001 Qgawa с соавторами (1971, 1973а, Ь) изучали гибель клеток миеломы мышей при действии алкилирующих соединений. После введения сарколизина мышам с опухолью выжившая фракция уменьшалась экспоненциально в зависимости от дозы и D0 составляло 0,1 мг/кг. При действии сарколизина на культуру тех же клеток D0 составляло 20 нг/мл. Если производить сравнение эффективности сарколизина in vitro и in vivo с учетом равномерного распределения препарата в организме, то можно заключить, что in vitro сарколизин значительно более эффективен. Миелома мыши in vivo характеризовалась исключительно высокой чувствительностью к циклофосфамиду D0 составила всего 0,8 мг/кг. Такая высокая чувствительность соответствует излечению части мышей после однократного введения циклофосфамида.

Среди этой группы соединений наиболее детально были изучены 5фторурацил, арабинозилцитозин и метотрексат. MadocJones и Bruce (1968) исследовали гибель клеток в суспензионной культуре фибробластов L при инкубации в среде с 5фторурацилом в течение 1 ч. Состав среды оказывал резкое влияние на зависимость дозаэффект. При отсутствии в среде тимидина и уридина во время действия препарата выжившая фракция уменьшалась экспоненциально с возрастанием дозы и составляла 0,01 при концентрации в среде 5фторурацила 15 мкг/мл. Если после инкубации с препаратом в среду добавляли тимидин или уридин, ход кривых дозаэффект резко менялся, после быстрого начального уменьшения выжившей фракции происходило ее медлен 29 ное падение. При добавлении тимидина в высокой концентрации кривая выходила на плато. Из этих данных следует важный вывод: тип зависимости выжившая фракция доза может изменяться в зависимости от состава среды. Изменение под влиянием состава среды не только чувствительности (величины D0), но и типа зависимости отражает действие препарата на несколько мишеней в клетке. Добавление тимидина на время действия препарата изменяло только наклон кривой дозаэффект. Высокая чувствительность фибробластов L, проявляющаяся при инкубации в среде без нуклеозидов, является искусственной. Так, при наличии в среде сыворотки минимальная выжившая фракция составляла 3 и кривая, как и при добавлении тимидина, состояла из двух компонентов. Диализ сыворотки снимал ее защитное действие. Очевидно, именно зависимость, наблюдаемая при наличии в среде сыворотки, соответствует действию 5фторурацила в организме.

В наших опытах гибель клеток в асцитной опухоли Эрлиха после введения циклофосфамида определялась методом конечного разведения при внутримозговом введении клеток. При взятии клеток для титрования через 4 ч после введения выжившая фракция уменьшалась при наименьшей из изученных доз (50 мг/кг) до 17, при терапевтической дозе (200 мг/кг) до 0,3 и при суперлетальной дозе (500 мг/кг) до 0,0001. Если клетки для титрования брали через 18 ч, то выжившая фракция при введении 200 мг/кг была прибли 42 зительно в 3 раза выше, чем при взятии клеток через 4 ч. Такое различие характерно и для других опухолей (Hahn е. а., 1973). Это, очевидно, является результатом частичного восстановления опухолевых клеток in situ или дополнительного повреждения в процессе обработки клеток in vitro.

Таким образом, изучение гибели клеток в культуре при действии алкилирующих соединений показало, что для большинства препаратов характерно образование сублетальных повреждений, которые проявляются в наличии плеча на кривой дозаэффект и в репарации, обнаруживаемой методом фракционирования доз. Во всех случаях происходило экспоненциальное уменьшение выжившей фракции при возрастании дозы, что приводило к значительной гибели клеток. В ряде случаев была установлена возможность модификации цитотоксического действия при изменении условий среды.

Sakamoto и Elkind (1966) изучали действие эмбихина на фибробласты хомячка, синхронизированные оксимочевиной. Интересной особенностью этой работы является определение зависимости выжившей фракции от дозы в резистентной субпопуляции синхронизированной культуры. Доза 1 мкг/мл, выбранная для изучения зависимости выжившей фракции от фазы цикла, снижала в асинхронной культуре выжившую фракцию до 1. В наиболее чувствительной субпопуляции эта доза снижала выжившую фракцию до 0,1. Зависимость выжившей фракции от дозы в асинхронной культуре и в резистентной субпопуляции (клетки в поздней фазе S) существенно не различалась. В обоих случаях кривая доза эффект имела плечо, кото 60 рое было лишь несколько больше для резистентной субпопуляции, и одинаковый наклон экспоненциальной части кривой.