Май 2011

В этом заключается огромное методологическое значение работ Bruce с соавторами. Однако следует иметь в виду, что эти работы выполнены на одном штамме опухолей перевиваемом лимфатическом лейкозе мышей AKR, обладающем исключительно высокой чувствительностью:к большинству химиотерапевтических препаратов, не типичной для многих опухолей.
Так, например, после введения 1 мг циклофосфамида выжившая фракция в лейкозе AKR была в 1000 раз меньше, чем в перевиваемых раковых опухолях.
Наиболее детально Bruce с соавторами изучили действие винбластина (Valeriote е. а., 1966а). На 4й день после перевивки 1 млн. клеток лимфомы мышам однократно вводили разные дозы винбластина и через 24 ч определяли выжившую фракцию. Выжившая фракция лейкозных клеток костного мозга после введения 0,2 мг винбластина падала до 0,1 и существенно не уменьшалась при увеличении дозы до 1 мг. Таким образом, кривая доза эффект имела два участка: экспоненциальное уменьшение выжившей фракции и плато. В селезенке выжившая фракция уменьшалась после введения 0,2 мг до 0,0017, т. е. в значительно большей степени, чем в костном мозге, и при увеличении дозы до 1 мг уменьшалась еще в 10 раз. Кривая доза эффект для лейкозных клеток в селезенке имела два участка экспоненциального и медленного падения выжившей фракции. ‘Следовательно, для винбластина характерно уменьшение действия при нарастании дозы (эффект насыщения). Результаты изучения зависимости выжившей фракции от дозы и времени действия винбластина были сопоставлены с результатами, предсказанными математической моделью выживаемости клеток. Модель Valeriote с соавторами (1966) представляет общий интерес для понимания закономерностей гибели клеток, так как при этом учитывается не только клеточная кинетика опухоли, но и фармакокинетика препарата.

Bhuyan с соавторами (1972) изучили действие ряда алкилирующих соединений на фибробласты хомячка, синхронизированные колцемидом. К тиофосфамиду были наиболее чувствительны клетки в фазах Gi, G2 и М. При этом чувствительность клеток по циклу варьировала не резко и снижалась лишь в середине фазы S. Среди других алкилирующих соединений тиофосфамид характеризуется наиболее равномерным распределением чувствительности по циклу. Чувствительность к хлорамбуцилу была максимальна в начале цикла, затем постепенно уменьшалась и достигала минимума в фазе G2. Чувствительность к сарколизину также была максимальна в начале цикла и затем снижалась, но в отличие от хлорамбуцила вновь резко повышалась в фазе G2. Следовательно, тиофосфамид и сарколизин отличаются от других алкилирующих соединений высокой чувствительностью клеток в фазе G2.

Зависимость гибели клеток от концентрации препарата в вилочковой железе мышей со спонтанной лимфомой в общем была такой же, как в перевиваемой лимфоме (Lin, Bruce, 1972). Отличия заключались в том, что спонтанная лимфома была несколько менее чувствительна к циклофосфамиду и арабинозилцитозину и значительно более чувствительна к гидрокортизону и аспарагиназе. Кривые дозаэффект для бисрхлорэтилнитрозомочевины и 5фторурацила были одинаковы в обеих опухолях. При повторных введениях арабинозилцитозина и метотрексата через 24 ч в вилочковой железе обнаруживалось 104 единиц спленомегалии (в контроле 8Х106 единиц), а в последующие сроки уменьшение выжившей фракции замедлялось. В отличие от этого при повторных 46 введениях винбластина выжившая фракция уменьшалась в течение 48 ч. Ни один из использованных препаратов не снижал число злокачественных клеток в вилочковой железе ниже 100, т. е. имело место максимальное уменьшение выжившей фракции до 0,001. В соответствии с этим все препараты давали лишь кратковременную ремиссию.

Borsa и Whitmore (1969) изучали гибель фибробластов L при действии метотрексата в течение 3 сут. При этом гибель клеток начиналась при концентрации препарата более 10 нг/мл, достигала максимума (выжившая фракция 1) при концентрации 40 нг/мл и не усиливалась при повышении концентрации до 10 мкг/мл. Таким образом, в кривой доза эффект имелось три участка: плечо, плато и между ними узкая зона эффективной концентрации. Добавление нуклеозидов не изменяло тип кривой, хотя резко усиливало гибель клеток и расширяло зону эффективной концентрации до 10100 нг/мл. При изучении зависимости гибели клеток от времени действия препарата в концентрации, превышающей максимально эффективную, было обнаружено наличие временного порога. Действие препарата в течение 10 ч было неэффективным и лишь через 40 ч достигался максимальный эффект. Таким образом, для достижения максимальной гибели клеток было необходимо действие метотрексата в концентрации, лишь в несколько раз превышающей пороговую, в течение довольно длительного времени. Покоящаяся культура, находящаяся в среде без метионина и гистидина, была практически не чувствительна к метотрексату.

Meeker, 1965; Valeriote e. a., 1966 a, b, 1968; Bruce e. a., 1966, 1967, 1969).
В этих работах впервые была изучена зависимость величины выжившей фракции от дозы для большого числа препаратов разных классов. Bruce с соавторами четко показали, что зависимость выжившей фракции от дозы характеризует роль интенсивности пролиферации для действия препарата. Эти работы стимулировали ряд исследований в различных лабораториях, что поставило изучение клеточных механизмов химиотерапии опухолей на высокий уровень, дало возможность классифицировать химиотерапевтические препараты, количественно охарактеризовать избирательность их действия на опухолевые клетки и осуществить рациональное комбинирование препаратов.