Май 2011

Hahn с соавторами (1973) изучили зависимость выжившей фракции от дозы для трех препаратов на перевиваемой солидной саркоме ЕМТ6. Клетки для титрования брали через 2 и 24 ч после введения препарата при развитии опухоли размером 100150 мм3. Общей особенностью всех кривых дозаэффект являлось отсутствие плеча, наличие двух компонентов (начального, чувствительного, и конечного, резистентного) и более высокое значение выжившей фракции через 24 ч. Наиболее значительную гибель клеток в этой опухоли вызывал циклофосфамид. При взятии опухоли для титрования через 24 ч 8090 клеток были чувствительны к препарату. После введения циклофосфамида в дозе 400 мг/кг выжившая фракция составляла 0,1. Различие между результатами титрования через 2 и 24 ч было для этого препарата относительно невелико. 5Фторурацил был значительно менее эффективен: после введения дозы 100 мг/кг достигалось минимальное значение выжившей фракции 50, которое не изменялось при увеличении дозы до 400 мг/кг. При взятии клеток для титрования через 2 ч после введения 5фторурацила выжившая фракция была существенно меньше, чем при взятии через 24 ч. Наиболее резкое различие в величине в выжившей фракции (в 100 раз) при взятии клеток через 2 и 24 ч имело место при введении блеомицина.

Значительный интерес представляет работа Hagemann с соавторами (1973), в которой гибель клеток в солидной и асцитной мастоцитоме изучалась на разных стадиях роста после введения бис3хлорэтилнитрозомочевины. Выжившая фракция определялась методом клонирования in vitro при эффективности посева 100. Кривая дозаэффект при действии препарата на асцитную опухоль в логарифмической фазе роста характеризовалась наличием плеча, в стационарной фазе отсутствием плеча и меньшей величиной D0. Гибель клеток в стационарной фазе начиналась при меньших концентрациях препарата. Следовательно, опухоль в стационарной фазе была значительно более чувствительна, чем опухоль в логарифмической фазе роста. Различие в чувствительности подчеркивается тем, что в стационарной фазе роста объем асцитной жидкости значительно больше и концентрация препарата во внеклеточной среде значительно меньше. После введения 15 мг/кг выжившая фракция в опухоли в стационарной фазе была в 100 раз меньше. В солидной мастоцитоме чувствительность к бис3хлорэтилнитрозомочевине также изменялась в зависимости от стадии роста, хотя и менее резко, чем в асцитной опухоли. Наиболее чувствительными были 6дневные опухоли, в которых гибель клеток вызывали наименьшие из изученных доз. На более поздних стадиях роста на кривых дозаэффект появлялось слабо выраженное плечо и наклон экспоненциальной части кривой 43 уменьшался. Интересно, что 18дневные опухоли были более чувствительны, чем 10дневные. Однако различие в чувствительности солидных опухолей на разных стадиях роста не было резким и выжившая фракция различалась не более чем в 10 раз. Сравнение величины выжившей фракции в солидной и асцитной опухолях указывает на резкое различие в чувствительности двух форм роста. Так, после введения бисРхлорэтилнитрозомочевины в дозе 30 мг/кг в асцитной опухоли на наиболее резистентной стадии роста выжившая фракция была в 5000 раз меньше, чем в солидной опухоли на наиболее чувствительной стадии роста. Чувствительность асцитной опухоли была близка к чувствительности той же опухоли в культуре. Фактором, определяющим резистентность солидной опухоли, является характер роста, поскольку солидную опухоль индуцировали перевивкой клеток чувствительной культуры.

Van Putten и Lilieveld (1970) показали, что клетки перевиваемой остеосаркомы характеризуются высокой чувствительностью к циклофосфамиду. После введения 300 мг/кг выжившая фракция в опухоли составляла 0,0001 Qgawa с соавторами (1971, 1973а, Ь) изучали гибель клеток миеломы мышей при действии алкилирующих соединений. После введения сарколизина мышам с опухолью выжившая фракция уменьшалась экспоненциально в зависимости от дозы и D0 составляло 0,1 мг/кг. При действии сарколизина на культуру тех же клеток D0 составляло 20 нг/мл. Если производить сравнение эффективности сарколизина in vitro и in vivo с учетом равномерного распределения препарата в организме, то можно заключить, что in vitro сарколизин значительно более эффективен. Миелома мыши in vivo характеризовалась исключительно высокой чувствительностью к циклофосфамиду D0 составила всего 0,8 мг/кг. Такая высокая чувствительность соответствует излечению части мышей после однократного введения циклофосфамида.

Среди этой группы соединений наиболее детально были изучены 5фторурацил, арабинозилцитозин и метотрексат. MadocJones и Bruce (1968) исследовали гибель клеток в суспензионной культуре фибробластов L при инкубации в среде с 5фторурацилом в течение 1 ч. Состав среды оказывал резкое влияние на зависимость дозаэффект. При отсутствии в среде тимидина и уридина во время действия препарата выжившая фракция уменьшалась экспоненциально с возрастанием дозы и составляла 0,01 при концентрации в среде 5фторурацила 15 мкг/мл. Если после инкубации с препаратом в среду добавляли тимидин или уридин, ход кривых дозаэффект резко менялся, после быстрого начального уменьшения выжившей фракции происходило ее медлен 29 ное падение. При добавлении тимидина в высокой концентрации кривая выходила на плато. Из этих данных следует важный вывод: тип зависимости выжившая фракция доза может изменяться в зависимости от состава среды. Изменение под влиянием состава среды не только чувствительности (величины D0), но и типа зависимости отражает действие препарата на несколько мишеней в клетке. Добавление тимидина на время действия препарата изменяло только наклон кривой дозаэффект. Высокая чувствительность фибробластов L, проявляющаяся при инкубации в среде без нуклеозидов, является искусственной. Так, при наличии в среде сыворотки минимальная выжившая фракция составляла 3 и кривая, как и при добавлении тимидина, состояла из двух компонентов. Диализ сыворотки снимал ее защитное действие. Очевидно, именно зависимость, наблюдаемая при наличии в среде сыворотки, соответствует действию 5фторурацила в организме.

В наших опытах гибель клеток в асцитной опухоли Эрлиха после введения циклофосфамида определялась методом конечного разведения при внутримозговом введении клеток. При взятии клеток для титрования через 4 ч после введения выжившая фракция уменьшалась при наименьшей из изученных доз (50 мг/кг) до 17, при терапевтической дозе (200 мг/кг) до 0,3 и при суперлетальной дозе (500 мг/кг) до 0,0001. Если клетки для титрования брали через 18 ч, то выжившая фракция при введении 200 мг/кг была прибли 42 зительно в 3 раза выше, чем при взятии клеток через 4 ч. Такое различие характерно и для других опухолей (Hahn е. а., 1973). Это, очевидно, является результатом частичного восстановления опухолевых клеток in situ или дополнительного повреждения в процессе обработки клеток in vitro.